失神经支配大鼠腓肠肌的演变及其miR-206和myoD表达的变化

摘要：目的 通过观察大鼠腓肠肌失神经支配后肌萎缩演变,探讨肌肉特异性miR-206及肌生成促进因子(myoD)在失神经性肌萎缩中的变化规律.方法 2015年6月至2016年1月,应用40只SPF级SD大鼠建立后肢失神经支配腓肠肌模型,根据腓肠肌失神经支配时间按照既定标准随机分为0d组、1d组、7d组、14 d组和28 d组,每组8只.根据失神经支配的时间点切取实验侧和对照侧腓肠肌标本进行检测,通过测定腓肠肌的湿重比和肌纤维横截面积比,评估腓肠肌萎缩的程度;并采用qPCR法检测腓肠肌中miR-206和myoDmRNA的含量,Western blot检测腓肠肌中myoD蛋白的表达.结果 大鼠实验侧腓肠肌随着失神经支配时间的延长,腓肠肌的萎缩程度逐渐加重,失神经腓肠肌肌腹逐渐减小,湿重比迅速下降,肌纤维横截面积逐渐减少,胶原纤维增多,结构逐渐紊乱;失神经支配0d、1d、7d、14d和28 d组腓肠肌湿重比分别为0.99±0.04、0.92±0.07、0.68±0.11、0.39±0.06、0.27 ±0.07,肌纤维横截面积比为分别为0.99±0.02、0.96 ±0.04、0.51±0.09、0.34±0.08、0.23±0.03,除1d组外,其余各实验组与对照组相比差异均有统计学意义(P＜0.05).失神经支配后,腓肠肌中miR-206、myoD mRNA以及myoD蛋白的表达水平呈现早期表达升高,失神经支配7d时达峰值,随后miR-206和myoD的表达水平均不同程度下降,总体上二者呈现的变化趋势相似.失神经支配0d、1d、7d、14 d和28 d组miR-206相对表达量分别为0.24±0.06、0.34±0.04、0.68±0.04、0.49±0.07、0.25±0.03,myoD mRNA相对表达量分别为0.41±0.06、0.49±0.09、0.93±0.06、0.66±0.03、0.39±0.04,除28 d组外,其余各实验组与对照组相比miR-206、myoD mRNA表达差异均有统计学意义(P＜0.05).失神经支配0d、1d、7d、14 d和28 d组myoD蛋白相对表达量灰度比分别为1.03±0.05、1.06±0.06、1.42±0.10、0.66±0.13、0.24±0.07,除1d组外,其余各实验组与对照组相比,myoD蛋白相对表达量灰度比差异均有统计学意义(P＜0.05).对实验组(1d、7d、14 d、28 d组)湿重比、肌纤维横截面积比、miR-206、myoD mRNA、myoD蛋白相对表达量灰度比进行组间分析,发现1d组与7d组、1d组与14 d组、1d组与28 d组、7d组与14 d组、7d组与28 d组、14 d组与28 d组中上述指标差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 大鼠腓肠肌的萎缩程度与失神经支配的时间有关,随失神经时间的延长,肌萎缩程度逐渐加重;并且腓肠肌中miR-206和myoD的表达规律相似,提示两者之间可能具有内在调控关系.